Anti - A
معرف های مونوکلونال آنتی بادی گروه های خونی
معرف های مونوکلونال آنتی بادی A وB از رده های سلولی هیبریدومای موشی به دست آمده است. این رده های سلولی هیبریدوما از آمیزش لنفوسیت های B تولید کننده آنتی بادی های موشی و سلول های میلومای موشی تهیه شده است و پس از کلون شدن، ماده مترشحه هیبریدومای ایجاد شده، حاوی معرف های مونوکلونال گروه های خون Anti-A و Anti-B می باشد.
این آنتی بادی ها قادر به تشخیص گروه های خونی بندناف و زیرگروه های خونیA (A1,A2B) وB (B,A1B) هستند. آنتی سرم های مونوکلونال با رقت های مناسب برای استفاده در دستگاه های اتوماتیک گروه بندی خون مناسب می باشند.
آزمایش با روش اسلاید:
1) یک قطره ازخون کامل(Whole Blood) یا سوسپانسیون گلبول قرمز50% در محلول کلرید سدیم 0/9% را روی اسلاید تمیز قرار دهید.
2) یک قطره از معرف آنتیبادی مونوکلونال مربوطه را به آن اضافه کنید.
3) به وسیله اپلیکاتور محتوای روی اسلاید را به مدت 15 ثانیه به خوبی مخلوط کنید و نتیجه را با چشم مشاهده نمایید.
4) نتیجه واکنش آگلوتیناسیون یا عدم واکنش، باید در مدت2دقیقه خوانده شود.
* توجه نمائید که خشک شدن اسلاید می تواند منجر به بروز نتیجه مثبت کاذب گردد.
الف: روش (Red Cell Grouping (Cell type:
در این روش گلبولهای قرمز نمونه مورد آزمایش، با معرف های Anti-A و Anti-B تست می گردد.
ب: روشSerum Grouping (Back type):
در این روش سرم نمونه مورد آزمایش با گلبول های شناخته شده1A، 2A، B و Oتست می گردد.
روش Red Cell Grouping (Cell type)
-سانتریفیوژ لولهای (روش فوری):
1) گلبول های قرمز نمونه را، با محلول کلرید سدیم0/9% ، حداقل سه مرتبه شستشو دهید و سوسپانسیون 5 -2 درصد در محلول کلرید سدیم 0/9% تهیه نمایید.
2) یک قطره (حدود 50 میکرولیتر) از معرف های Anti-A یا Anti-B را در دو لوله آزمایش 75×12میلی متری برچسب زده بریزید.
3) یک قطره از سوسپانسیون گلبول های قرمز تهیه شده را به هر لوله اضافه کنید.
4) محتویات لوله را مخلوط کرده و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید.
5) لوله ها را به مدت30ثانیه با سرعت rpm 3000 سانتریفیوژ نمایید.
6) با تکان دادن، به آرامی رسوب انتهای لوله را جدا کنید و نتیجه را به صورت چشمی قرائت کنید.
-سدیمانتاسیون لولهای:
1) یک قطره از معرف های Anti-A یا Anti-B را در دو لوله آزمایش75×12میلیمتری برچسب زده بریزید.
2) یک قطره از سوسپانسیون 5-2 درصد گلبول های قرمز در محلول کلرید سدیم 0/9%را به هر لوله اضافه کنید.
3) محتویات لوله ها را مخلوط کرده و به مدت یک ساعت در دمای اتاق قرار دهید.
4) لوله ها را به آرامی تکان داده و آگلوتیناسیون گلبول های قرمز را به طریق چشمی مشاهده نمایید.
روشSerum Grouping (Back type)
1) یک قطره از سرم نمونه مورد آزمایش را، در چهار لوله 75 ×12میلیمتری برچسب زده شده بریزید.
2) یک قطره از سوسپانسیون 5 -2 درصد گلبول های قرمز شسته شده 1A، 2A، BوO در محلول کلرید سدیم 0/9% را به هریک از لوله ها اضافه کنید.
3) محتویات لوله ها را مخلوط کرده و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید.
4) لوله ها را به مدت30ثانیه با سرعت rpm 3000 سانتریفیوژ نمایید.
5) با تکان دادن، به آرامی رسوب انتهای لوله را جدا کنید و نتیجه را به صورت چشمی قرائت کنید.
جدول تفسیر نتایج
حداقل قدرت آگلوتیناسیون معرفها در مقایسه با حداقل قدرت آگلوتیناسیون استانداردهای مرجع
Institute of Biological Standards and Controls) (National NIBSC تعیین می گردد.
- استاندارد مرجع Anti A : 03/188NIBSC
- استاندارد مرجع Anti B : 03/164NIBSC
کنترل کیفی داخلی
کنترل کیفی معرف ها با استفاده از سلول های خونی قرمز شسته شده با محلول کلرید سدیم 9/0% و تهیه serial dilution با استفاده از محلول کلرید سدیم 0/9% حاوی 2% آلبومین سرم گاوی انجام می شود.
احتیاطهای لازم در حین استفاده:
1) این معرف ها حاوی 0/1 درصد سدیم آزاید به عنوان ماده نگهدارنده می باشند، لذا در هنگام استفاده کلیه نکات ایمنی کار با ماده شیمیایی رعایت شود.
2) از ایجاد آئروسل اجتناب شود.
3) به صورت مستقیم روی سوبسترا ریخته نشود.
4) در دمای 8 - 2 درجه سانتیگراد نگهداری شود.
5) قبل از استفاده به مدت نیم ساعت در دمای اتاق نگهداری شود.
6) پایداری معرف تا تاریخ ذکر شده روی بسته بندی می باشد.
7) در صورت مشاهده هر گونه کدورت از مصرف معرف خودداری شود.
8) به منظور کنترل کیفی معرف ها، آزمایش های روزانه کنترل کیفی با استفاده از گلبول های قرمز شناخته شده الزامی است.
الف)کنترل مثبت: گلبول های قرمز شناخته شده حاوی آنتی ژن مورد نظر برای تشخیص آنتی بادی مربوطه میباشند.
ب) کنترل منفی: گلبول های قرمز فاقد آنتی ژن در مقابل آنتی بادی مربوطه می باشند.
9. نظر به اینکه عدم وجود ویروس های موشی در آنتی بادی های مونوکلونال تاکنون مشخص نشده است، لذا اکیدا" از پیپت کردن این معرف ها از طریق دهان خودداری شود و کلیه اصول ایمنی در هنگام کار رعایت گردد.
معرف های مونوکلونال آنتی بادی گروه های خونی
معرف های مونوکلونال آنتیبادی A وB از ردههای سلولی هیبریدومای موشی به دست آمده است. این رده های سلولی هیبریدوما از آمیزش لنفوسیت های B تولید کننده آنتی بادی های موشی و سلول های میلومای موشی تهیه شده است و پس از کلون شدن، ماده مترشحه هیبریدومای ایجاد شده، حاوی معرف های مونوکلونال گروه های خون Anti-A و Anti-B می باشد.
این آنتی بادی ها قادر به تشخیص گروه های خونی بندناف و زیرگروه های خونیA (A1,A2B) وB (B,A1B) هستند. آنتی سرم های مونوکلونال با رقت های مناسب برای استفاده در دستگاه های اتوماتیک گروه بندی خون مناسب می باشند.
آزمایش با روش اسلاید:
1) یک قطره ازخون کامل(Whole Blood) یا سوسپانسیون گلبول قرمز50% در محلول کلرید سدیم 0/9% را روی اسلاید تمیز قرار دهید.
2) یک قطره از معرف آنتیبادی مونوکلونال مربوطه را به آن اضافه کنید.
3) به وسیله اپلیکاتور محتوای روی اسلاید را به مدت 15 ثانیه به خوبی مخلوط کنید و نتیجه را با چشم مشاهده نمایید.
4) نتیجه واکنش آگلوتیناسیون یا عدم واکنش، باید در مدت2دقیقه خوانده شود.
* توجه نمائید که خشک شدن اسلاید می تواند منجر به بروز نتیجه مثبت کاذب گردد.
الف: روشRed Cell Grouping (Cell type):
در این روش گلبولهای قرمز نمونه مورد آزمایش، با معرف های Anti-A و Anti-B تست می گردد.
ب: روشSerum Grouping (Back type):
در این روش سرم نمونه مورد آزمایش با گلبول های شناخته شده1A، 2A، B و Oتست می گردد.
روش Red Cell Grouping (Cell type)
-سانتریفیوژ لولهای (روش فوری):
1) گلبول های قرمز نمونه را، با محلول کلرید سدیم 0/9% ، حداقل سه مرتبه شستشو دهید و سوسپانسیون 5 -2 درصد در محلول کلرید سدیم 0/9% تهیه نمایید.
2) یک قطره (حدود 50 میکرولیتر) از معرف های Anti-A یا Anti-B را در دو لوله آزمایش 75×12میلی متری برچسب زده بریزید.
3) یک قطره از سوسپانسیون گلبول های قرمز تهیه شده را به هر لوله اضافه کنید.
4) محتویات لوله را مخلوط کرده و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید.
5) لوله ها را به مدت30ثانیه با سرعت rpm 3000 سانتریفیوژ نمایید.
6) با تکان دادن، به آرامی رسوب انتهای لوله را جدا کنید و نتیجه را به صورت چشمی قرائت کنید.
-سدیمانتاسیون لولهای:
1) یک قطره از معرف های Anti-A یا Anti-B را در دو لوله آزمایش75×12میلیمتری برچسب زده بریزید.
2) یک قطره از سوسپانسیون 5-2 درصد گلبول های قرمز در محلول کلرید سدیم 0/9%را به هر لوله اضافه کنید.
3) محتویات لوله ها را مخلوط کرده و به مدت یک ساعت در دمای اتاق قرار دهید.
4) لوله ها را به آرامی تکان داده و آگلوتیناسیون گلبول های قرمز را به طریق چشمی مشاهده نمایید.
روشSerum Grouping (Back type)
1) یک قطره از سرم نمونه مورد آزمایش را، در چهار لوله 75 ×12میلیمتری برچسب زده شده بریزید.
2) یک قطره از سوسپانسیون 5 -2 درصد گلبول های قرمز شسته شده 1A، 2A، BوO در محلول کلرید سدیم 0/9% را به هریک از لوله ها اضافه کنید.
3) محتویات لوله ها را مخلوط کرده و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید.
4) لوله ها را به مدت30ثانیه با سرعت rpm 3000 سانتریفیوژ نمایید.
5) با تکان دادن، به آرامی رسوب انتهای لوله را جدا کنید و نتیجه را به صورت چشمی قرائت کنید.
جدول تفسیر نتایج
حداقل قدرت آگلوتیناسیون معرف ها در مقایسه با حداقل قدرت آگلوتیناسیون استانداردهای مرجع
Institute of Biological Standards and Controls) (National NIBSC تعیین می گردد.
- استاندارد مرجع Anti A : 03/188NIBSC
- استاندارد مرجع Anti B : 03/164NIBSC
کنترل کیفی داخلی
کنترل کیفی معرف ها با استفاده از سلول های خونی قرمز شسته شده با محلول کلرید سدیم 0/9% و تهیه serial dilution با استفاده از محلول کلرید سدیم 0/9% حاوی 2% آلبومین سرم گاوی انجام می شود.
احتیاطهای لازم در حین استفاده:
1) این معرف ها حاوی0/1 درصد سدیم آزاید به عنوان ماده نگهدارنده می باشند، لذا در هنگام استفاده کلیه نکات ایمنی کار با ماده شیمیایی رعایت شود.
2) از ایجاد آئروسل اجتناب شود.
3) به صورت مستقیم روی سوبسترا ریخته نشود.
4) در دمای 8 - 2 درجه سانتیگراد نگهداری شود.
5) قبل از استفاده به مدت نیم ساعت در دمای اتاق نگهداری شود.
6) پایداری معرف تا تاریخ ذکر شده روی بسته بندی می باشد.
7) در صورت مشاهده هر گونه کدورت از مصرف معرف خودداری شود.
8) به منظور کنترل کیفی معرف ها، آزمایش های روزانه کنترل کیفی با استفاده از گلبول های قرمز شناخته شده الزامی است.
الف)کنترل مثبت: گلبول های قرمز شناخته شده حاوی آنتی ژن مورد نظر برای تشخیص آنتی بادی مربوطه می باشند.
ب) کنترل منفی: گلبول های قرمز فاقد آنتی ژن در مقابل آنتی بادی مربوطه می باشند.
9) نظر به اینکه عدم وجود ویروس های موشی در آنتی بادی های مونوکلونال تاکنون مشخص نشده است، لذا اکیدا" از پیپت کردن این معرف ها از طریق دهان خودداری شود و کلیه اصول ایمنی در هنگام کار رعایت گردد.