آنتی هیومن گلوبولین Anti - Human Globulin

آنتی ﻫﯿﻮﻣﻦ گلبوﻟﯿﻦ

آنتی ژنﻫﺎی سطحی گلبولﻫﺎی ﻗﺮﻣﺰ طبیعی اﻧﺴﺎن میﺗﻮاﻧﻨﺪ در ﺣﻀﻮر آنتی بادیﻫﺎی ﺑﻠﻮکان )IgG( ضد ﺧـﻮد ﺣﺴـﺎس شوند، اﻣﺎ ﺑﻪ دﻟﯿﻞ ﺧﺼﻮﺻﯿﺖ طبیعی آنتی­ ژن و آنتیﺑﺎدی ﻣﺮﺑﻮﻃﻪ، ﻗﺎدر ﺑﻪ اﯾﺠﺎد آگلوﺗﯿﻨﺎﺳﯿﻮن نمیﺑﺎﺷﻨﺪ. آﻧﺘـی ﻫﯿـﻮﻣﻦگلبوﻟﯿﻦ ﺑﺎ گلبولﻫﺎی ﻗﺮﻣﺰﺣﺴﺎس ﺷﺪه ﺗﻮﺳﻂ آنتیﺑﺎدی (گاﻣﺎ گلبوﻟﯿﻦ) ﯾﺎ اﺟﺰاء کمپلمان (ﺑتاگلبوﻟﯿﻦ) واکـﻨﺶ داده و اﯾﻦ اﻣﺮ ﻣﻮﺟﺐ آگلوﺗﯿﻨﺎﺳﯿﻮن می­گردد.

معرف آنتیﻫﯿﻮﻣﻦ گلبوﻟﯿﻦ، ﺟﻬﺖ اﻧﺠﺎم آزﻣﺎﯾﺶﻫﺎیﺳﺎزگاری، ﺗﺸﺨﯿﺺ آنتی ﺑﺎدی ﺑﻠﻮکان IgG)(، آزﻣﻮنﻫـﺎی ﺳـﻠﻮل­های خونی ﺑﻨﺪ ﻧﺎف و ﺷﻨﺎﺳﺎیی گروه ﺧﻮنی Du کارﺑﺮد دارد.

آزمایش آنتی­ گلبولین مستقیم:

1) نمونه گلبول ﻗﺮﻣﺰ ﻣﻮرد آزﻣﺎﯾﺶ را ﺑﺎ ﺳﺮم ﻓﯿﺰﯾﻮﻟﻮژی NaCl 0.9% ) ) سه مرتبه شستشو دﻫﯿﺪ.

2) از گلبولﻫﺎی ﺷﺴﺘﻪﺷﺪه ﺳﻮسپاﻧﺴﯿﻮن 5 -2 درﺻﺪ در ﺳﺮم ﻓﯿﺰﯾﻮﻟﻮژی ﺗﻬﯿﻪ ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ.

3) یک ﻗﻄﺮه ازﺳﻮسپاﻧﺴﯿﻮن گلبول ﻗﺮﻣﺰ آﻣﺎده را در یک ﻟﻮﻟﻪ آزﻣﺎﯾﺶ ﺑﺮﯾﺰﯾﺪ وﺣـﺪاﻗﻞ3ﻣﺮﺗﺒـﻪ ﺑـﺎ اﺳـﺘﻔﺎده از ﺳـﺮم ﺷﺴﺘﺸﻮ دﻫﯿﺪ و پس از آﺧﺮﯾﻦ ﺷﺴﺘﺸﻮ، ﻣﺎﯾﻊ رویی را کاﻣﻼ ً ﺗﺨﻠﯿﻪ ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ.

4) 2 قطره آنتی ﻫﯿﻮﻣﻦ گلبوﻟﯿﻦ ﺑﻪ آن اﺿﺎﻓﻪ کنید.

5) لوله را پس از ﻣﺨﻠﻮط کردن ﺑﻪ ﻣﺪت30ﺛﺎﻧﯿﻪ ﺑﺎ ﺳﺮﻋﺖ rpm 3000 سانتریفیوژ نمایید.

6) لوله را ﺑﻪ آهستگی تکان داده و ﺑﺎ چشم ﻏﯿﺮ ﻣﺴﻠﺢ از ﻧﻈﺮ وﺟﻮد آگلوﺗﯿﻨﺎﺳﯿﻮن ﺑﺮرسی کنید.

7) در ﺻﻮرت منفی ﺑﻮدن ﻧﺘﯿﺠﻪ، یک ﻗﻄﺮه ﺳﻠﻮل +) (Rh  O حساس شده با IgG (سلول کنترل کومبس) را به لوله اضافه کرده و اﯾﺠﺎد آگلوﺗﯿﻨﺎﺳﯿﻮن را ﺑﺮرسی کنید.

آزمایش آنتی گلبولین غیرمستقیم:

1) از گلبولﻫﺎی ﺷﺴﺘﻪ ﺷﺪه گروه خونی  ) + (Rh   Oسوسپانسون  5-2 درﺻﺪ در ﺳﺮم ﻓﯿﺰﯾﻮﻟﻮژی ﺗﻬﯿﻪ ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ.

2) یک ﻗﻄﺮه از ﺳﻮسپاﻧﺴﯿﻮن گلبول ﻗﺮﻣﺰ آﻣﺎده را در یک ﻟﻮﻟﻪ آزﻣﺎﯾﺶ ﺑﺮﯾﺰﯾﺪ.

3) به محتوای ﻟﻮﻟﻪ، 1ﻗﻄﺮه از ﺳﺮم ﺑﯿﻤﺎر اﺿﺎﻓﻪ کنید.

4) محتوای  ﻟﻮﻟﻪ را ﺑﻪ ﻣﺪت30 ﺗﺎ60 دﻗﯿﻘﻪ در دﻣﺎی37درﺟﻪ ﺳﺎﻧتیگراد انکوﺑﻪ کنید.

5) مخلوط ﺣﺎﺻﻞ را ﺣﺪاﻗﻞ 3 ﻣﺮﺗﺒﻪ ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺳﺮم ﻓﯿﺰﯾﻮﻟﻮژی ﺷﺴﺘﺸﻮ دﻫﯿﺪ و پس از آﺧﺮﯾﻦ ﺷﺴﺘﺸﻮ، ﻣﺎﯾﻊ روﯾـی را کاﻣﻼ ً ﺗﺨﻠﯿﻪ ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ.

6) به رﺳﻮب گلبولﻫﺎی ﻗﺮﻣﺰ، 2 ﻗﻄﺮه آنتی هیومن گلبولین اضافه کرده و لوله را به خوبی تکان داده و به مدت 30ثانیه با سرعت rpm3000 سانتریفیوژ نمایید.

7) لوله را ﺑﻪ آهستگی تکان داده و ﺑﺎ چشم ﻏﯿﺮ ﻣﺴﻠﺢ، از ﻧﻈﺮ وﺟﻮد آگلوﺗﯿﻨﺎﺳﯿﻮن ﺑﺮرسی کنید.

8) در ﺻﻮرت منفی ﺑﻮدن ﻧﺘﯿﺠﻪ، ﺟﻬﺖ ﺑﺮرسی ﺻﺤﺖ آزﻣﺎﯾﺶ، یک ﻗﻄﺮه ﺳﻠﻮل ) + (Rh   Oحساس شده با IgG (سلول کنترل کومبس)، ﺑﻪ ﻟﻮﻟﻪ اﺿﺎﻓﻪ کرده و اﯾﺠﺎد آگلوﺗﯿﻨﺎﺳﯿﻮن را ﺑﺮرسی کنید. در ﺻـﻮرت ﺻـﺤﺖ آزﻣـﺎﯾﺶ آگلوﺗﯿﻨﺎﺳـﯿﻮن اﯾﺠﺎد می­گردد.

احتیاط­های لازم در حین استفاده:

1)  از اﯾﺠﺎد آﺋﺮوﺳﻞ اﺟﺘﻨﺎب ﺷﻮد.

2)  در دﻣﺎی8-2درﺟﻪ ﺳﺎنتیگراد نگهداری ﺷﻮد.

3) قبل از اﺳﺘﻔﺎده ﺑﻪ ﻣﺪت ﻧﯿﻢ ﺳﺎﻋﺖ در دﻣﺎی اﺗﺎق نگهداری ﺷﻮد.

4) از ﻣﺼﺮف ﻣﻌﺮف ﺗﺎرﯾﺦ گذﺷﺘﻪ ﺧﻮدداری گردد.

5)  در ﺻﻮرت ﻣﺸﺎﻫﺪه ﻫﺮ گوﻧﻪ کدورت از ﻣﺼﺮف ﻣﻌﺮف ﺧﻮدداری ﺷﻮد.

6) اﯾﻦ ﻣﻌﺮف ﻫﺎ ﺣﺎوی 0/1 درﺻﺪ ﺳﺪﯾﻢ آزاﯾﺪ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻣﺎده نگهدارﻧﺪه می­باشند . ﻟﺬا در هنگام اﺳﺘﻔﺎده، کلیه نکات اﯾﻤﻨـی کار ﺑﺎ ﻣﺎده ﺷﯿﻤﯿﺎیی رﻋﺎﯾﺖ ﺷﻮد.